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杂交用DNA探针制备试剂盒Random Primer DNA Labeling Kit Ver.2
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	6045	Random Primer DNA Labeling Kit Ver.2	30 Rxns	￥667

■ 制品内容 (30 次量)

Random Primer (9 mer) 60 μl 10 × Buffer 75 μl dNTP Mixture (dGTP,dATP,dTTP各0.2 mM) 75 μl Exo-free Klenow Fragment (2 U/μl) 30 μl Control DNA solution (λ-Hind III digest 25 ng/μl) 10 μl

■ 制品说明

本试剂盒利用 [α–32P]或[3H]dCTP标记DNA，制备具有高比活性的杂交用DNA探针。本试剂盒的设计以Feinberg和Vogelstein法为基础加以了改进，利用9个碱基的随机寡聚核苷酸引物以及E. coli DNA Polymerase I 的 Exonuclease-free Klenow Fragment (无3′ →5′ 外切酶活性) ，在短时间内 (2-3分钟)即能得到比活性为1×109 dpm/μg的探针。它克服了表1中切口平移法的许多缺点。   ■ 原 理 利用杂交法检定具有特异序列的DNA时，必须使用高比放射活性的DNA探针。Feinberg和Vogelstein发表的随机引物标记法从少量DNA (10-20 ng) 制得的探针具有很高的比活性，并且可以直接在低熔点琼脂糖凝胶中标记DNA片段。原理如图1所示。首先通过热变性使模板DNA变为单链DNA，然后使随机引物与单链DNA退火，再利用Klenow Fragment合成互补链形成标记和未标记的核苷酸。 表1

切口平移法  随机引物法 反应时间 延长反应时间会降低标记效率。     短时间内即可得到高比活性的探针。即使反应时间延长也不受影响。 探针比活性 ～108 dpm/μg     ～109 dpm/μg 模板纯度 琼脂糖等抑制反应     琼脂糖对反应没有影响 反应后纯化 需要除去未反应的dNTP     不需要除去未反应的dNTP 模板量要求 ≥1 μg     ≥25 ng

以上对比数据的依据：以50 μCi的[α-32P]dCTP(370 MBq/ml)标记λ DNA-Hind III，以此为模板进行多重对照实验。

图1 Random Primer Labeling原理

页面更新：2024-02-29 08:29:58